1.转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳，具体铺板密度根据细胞情况酌情而定。

2.制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂。

3.转染的时候培养基中不能添加抗生素。

4.使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。

5.2-8ºC保存，要注意避免多次反复长时间开盖。

6.初次使用应优化核酸浓度和试剂量以得到最高的转染效率。

7.本产品仅作科研用途！

 

操作说明

1. DNA 转染

注：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

1) 细胞铺板，至转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳。

2) 按照下表使用Opti-MEM培养基稀释B溶液，轻轻混匀。

3) 使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。

4) 将稀释的DNA加入已稀释的B溶液中(1:1比例)。

5) 室温孵育5分钟

6) 将DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。

7) 37℃，5% CO2培养箱培养 48-96 h，直至进行基因表达分析。

2. siRNA 转染

转染 siRNA 操作与 DNA 的转染操作流程一样，但在稀释 siRNA 时则不需要加入A 溶液(第 3 步)。

不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

培养皿		96-well	24-well	6-well
贴壁细胞		1~4×104	0.5~2×105	0.25~1×106
使用Opti-MEM 培养基稀释B溶液，轻轻混匀。	Opti-MEM 培养基	5 μL	25 μL	125 μL
	B 溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加A溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。	Opti-MEM 培养基	5 μL	25 μL	125 μL
	DNA (0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	A溶液(2 μL/μg DNA)	0.2 μL	1 μL	5 μL
将稀释的DNA加入已稀释的B溶液中(1:1比例)。	稀释的DNA	5 μL	25 μL	125 μL
	稀释的B溶液	5 μL	25 μL	125 μL
室温孵育 5 分钟
DNA-脂质体复合物形成	复合物成分（每孔）	96-well	24-well	6-well
	Opti-MEM 培养基	10 μL	50 μL	250 μL
	DNA(0.5–5 μg/μL)	0.1 μg	0.5 μg	2.5 μg
	B 溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
	A 溶液	0.2 μL	1 μL	5 μL
将 DNA-脂质体复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。	DNA-脂质体复合物	10 μL	50 μL	250 μL