Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
货号 |
C331301E |
C331301S |
C331301M |
C331301L |
C331301T |
规格 |
100 T |
500 T |
1000 T |
3×1000 T |
10×1000 T |
2-8℃干燥避光储存,有效期1年。-20℃干燥避光保存,有效期2年。冰袋运输。
操作注意
操作说明
a)先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。
b)按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。
c)接种后培养2-4 h使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)
a)在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2)。
b)向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
c)将培养板在培养箱内孵育1-4 h。
d)用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
e)若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24 h内测定,吸光度不会发生变化。
a)在96孔板中配制100 μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24 h(37℃,5% CO2)。
b)向培养板加入10 μL不同浓度的待测物质。
c)将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48 h)。
d)向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
e)将培养板在培养箱内孵育1-4 h。
f)用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
g)若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24 h内测定,吸光度不会发生变化。
注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力
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