基质胶是一种从EHS小鼠肿瘤中提取的可溶性基底膜制剂，含有丰富的细胞外基质蛋白。其主要成分包括层粘连蛋白、IV型胶原、肝素硫酸蛋白多糖（HSPGs）、nidogen，以及TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织型纤溶酶原激活剂等生长因子，这些生长因子是EHS肿瘤中天然存在的。

基质胶最早由J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm在20世纪80年代中期在丹麦发现并详细描述。主要的生产过程包括用生理盐水提取/洗涤肿瘤匀浆以获得可溶性蛋白，然后从产品中提取不溶性复合物的溶剂，以及在低温下用缓冲溶液进行透析以获得无色至淡黄色的溶液。
 

表：基质胶的组成[1]

 

基质凝胶为组织和细胞提供了支持、拉伸强度和支架支持。它还作为细胞粘附和移动的三维亚结构，以及生长因子、趋化因子和细胞因子的储存库。此外，它还可以作为细胞形态变化和分化的信号。

由Arcegen Biotechnology开发和生产的Arcegel基质凝胶不含LDEV（乳酸脱氢酶升高病毒），内毒素含量极低。它经过了彻底的支原体检测，以确保无支原体污染，包括不同类型如基础浓度、高浓度、低生长因子等的基质凝胶。
 

 

应用指南

产品特点

高安全性：无LDEV（乳酸脱氢酶升高病毒）

多种浓度：浓度范围在8~20毫克/毫升之间

良好的批间稳定性：严格的生产质量检验流程确保不同批次之间的性能稳定

低内毒素：内毒素含量 ≤ 4 EU/毫升

污染物检测：经检测无支原体、细菌和真菌残留

高单批产量：单批产量超过升级别

良好的兼容性：与任何类型的细胞培养基兼容
 

 

迁移和侵袭实验

图：迁移和侵袭实验的过程

1. 基质胶涂层

首先，将收到的Arcegel基质胶解冻，并用无血清培养基稀释至1:8的比例（最终浓度不应超过3 mg/ml），用于涂层Transwell小室插入件的上室膜。将其放置在37°C下30分钟，以使Arcegel基质胶聚合成凝胶状。在使用前需保持膜的湿润。

2. 细胞悬浮液的制备

1. 将细胞饥饿处理12-24小时以去除血清的影响（可选步骤）。

2. 消化细胞，消化后进行离心，弃去培养基，并用PBS洗涤1-2次。在含有BSA的无血清培养基中重悬细胞，调整细胞密度至4×10^4至2×10^5细胞/毫升。
 

3. 细胞接种
1. 向Transwell小室插入件中加入100μl的细胞悬浮液。

2. 向24孔板的下室中加入600μl含有20% FBS的培养基。注意避免下室培养基与插入件之间形成气泡，因为气泡可能会削弱甚至完全抵消下室培养基的趋化效应。

3. 培养细胞：进行标准培养12-48小时（时间主要取决于癌细胞的侵袭能力）。
 

4. 结果收集
1. 取出Transwell小室插入件，弃去孔中的培养基，用无钙PBS洗两次，用4%多聚甲醛固定30分钟，然后适当晾干插入件。

2. 使用0.1%结晶紫染色20分钟，轻轻擦去上表面未迁移的细胞，用PBS冲洗三次，然后在显微镜下400倍放大观察并计数五个随机视野中的细胞。
 

 

图：细胞侵袭后结晶紫染色的结果。

 

常见问题解答

Q1: 收到的基质凝胶颜色变化（从淡黄色变为深红色）的原因是什么？
A: 对于含有酚红的基质凝胶，颜色变化的主要原因是酚红与碳酸氢盐和二氧化碳之间的相互作用。然而，在与5%二氧化碳平衡后，颜色差异会减小。解冻后，轻轻摇晃试剂瓶，以确保基质凝胶均匀分散。

Q2: 处理基质凝胶时应采取哪些预防措施？
A: 所有操作都应在无菌条件下进行，并使用预冷的移液枪头以确保基质凝胶处于均匀的糊状状态。

Q3: 如何分装、冷冻和使用基质凝胶？
A: 解冻后，Arcegel基质凝胶可以分装到多个预冷的小管中。所有分装都应使用预冷的冷冻管，并快速冷冻储存，以避免多次冻融。使用过程中涉及的所有物品都应预冷，包括处理基质凝胶时使用的预冷移液枪头、枪头和管子。
 

 

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