随着医疗行业的蓬勃发展，类器官/干细胞培养的普及度持续上升，胃类器官也是在类器官培养中受到相当关注的类型之一。体外培养的胃类器官包含多种细胞亚型，通常来源于胃干细胞或多能诱导干细胞。它们的培养环境模拟了体内的微环境，因此胃类器官在细胞组成、空间结构和生物功能方面与胃上皮组织高度相似，为研究人类胃生理和疾病提供了有利的平台和工具。

胃类器官的培养相对复杂。胃上皮腺体可以分为胃底腺和胃幽门腺，这两种腺体都可以用来构建胃上皮类器官。胃上皮类器官培养的原理是在三维条件下培养胃上皮干细胞，这需要添加小分子化合物（如胃泌素、Y-27632）和生长因子来刺激干细胞的增殖、分化和形成球形结构。胃泌素I是一种必须添加到胃类器官培养基中的小分子化合物，通常使用的工作浓度为1-10纳摩尔。以下是胃类器官培养的大致流程以及所需的各种化合物、生化试剂、生长因子、耗材等的总结。

胃类器官培养所需的化合物、生化试剂、生长因子等：

Recombinant Human FGF-10 Protein, His Tag	C230418
Recombinant Human EGF Protein	C230328
Recombinant Human Wnt -3a Protein	C230259
Recombinant  Human RSPO1 Protein	C230254
Recombinant Human Noggin Protein,His Tag	C230462

 

培养方法

胃类器官的复苏

1、将含有类器官的冷冻保存管放入37°C水浴中快速解冻2-3分钟。

2、将类器官从保存管转移到锥形管中，并加入适量的胃类器官培养基。用血清移液管上下吹打2-3次以重悬类器官。

3、以500g的速度离心3分钟，使胃类器官沉淀，并弃去上清液。

4、在低生长因子提取物中重悬胃类器官，用血清移液管上下吹打2-3次直至完全分散，然后加入到24孔板中，并加入适量的重悬培养基。

5、将24孔板放入细胞培养箱中培养约30分钟。

6、准备胃类器官传代培养基。

7、向每个孔中加入适量的胃类器官传代培养基。

8、将含有胃类器官的培养板放入细胞培养箱中进行进一步培养。

胃类器官的培养

1、每2-3天更换一次培养基，弃去废培养基并用新鲜培养基替换。连续培养1-2周后进行传代。

胃类器官的传代

1、在显微镜下观察胃类器官的生长状况。每个24孔板的孔可以含有500-1000个类器官。

2、将含有胃类器官的24孔板转移到锥形管中。

3、以500g的速度离心3分钟，使胃类器官沉淀。从管底吸去培养基进行消化和提取。

4、用血清移液管轻轻上下吹打2-3次，然后将锥形管放入37°C水浴中消化和提取10-15分钟。

5、向锥形管中加入适量的FBS以终止消化。

6、用血清移液管轻轻上下吹打2-3次，然后过滤分离类器官。

7、以500g的速度离心3分钟，使胃类器官沉淀并弃去上清液。

8、在培养基中重悬类器官，加入到24孔板中，并将板放入细胞培养箱中25-30分钟。

9、向24孔板中加入适量的传代培养基，并在细胞培养箱中继续培养。

 

图 从多能干细胞分离的胚胎成分可用于组织工程中，以生成复杂的人类胃类器官

[1] Eicher A K ,  Kechele D O ,  Sundaram N , et al. Functional human gastrointestinal organoids can be engineered from three primary germ layers derived separately from pluripotent stem cells - ScienceDirect.  2021.