乳腺癌（BC）是全球女性中最常见的恶性肿瘤。为了设计新的个性化治疗方法，全面理解正常乳腺发育、癌变和疾病进展的潜在过程是必要的。然而，缺乏合适且广泛可用的体外模型阻碍了这一进程。

类器官是体外培养的三维细胞结构，模拟体内器官的细胞结构，能够更准确地保留体内细胞的生物学特性和功能。乳腺类器官能够准确复制体内乳腺微环境，并已被用于检查影响信号通路、基因表达和组织重塑的因素。

乳腺类器官培养方案

我们根据Clevers H发表的两篇文章[1][2]汇编了一份从乳腺组织中生成乳腺类器官的培养方案。这个模型可以用于正常人类乳腺组织或乳腺癌组织衍生的类器官的长期培养。

图 乳腺癌组织分化为乳腺类器官的过程（PMID: 33692550）[2]

 

1、从乳腺组织切除物中分离上皮细胞

1.1 将每个组织样本（<3-4 cm³）转移到含有D-BSA（DMEM GlutaMAX培养基中加入终浓度0.1%不含脂肪酸的BSA）的50 mL Falcon试管中，用手术刀将组织切成0.5-1 mm³的小块（组织块应均匀且略显粘稠）。

1.2 用D-BSA洗涤组织碎片几次，让其沉淀，然后去除上清液。

1.3 加入Type I培养基，充分混匀，然后加入终浓度1 mg/mL的Type II胶原酶和10 μM Y-27632，在37°C下消化1-2小时。

1.4 通过加入FBS终止消化，过滤通过100 μm滤网，450 g离心5分钟以去除上清液。

1.5 如果沉淀物呈红色，加入红细胞裂解缓冲液，室温孵育2分钟，然后加入D-BSA，450 g离心5分钟以去除上清液。

 

2、类器官培养

2.1 在BME（基底膜提取物，或用Matrigel替代）中重悬细胞沉淀，充分混合后，逐滴滴加到12孔板中。倒置并在37°C下固化。

图 12孔板中BME滴液的代表性图像（PMID：33692550）[2]

 

2.2 添加适量的Type I培养基（Advanced DMEM/F12, 10% R-spondin1-conditioned medium, 10% Noggin-conditioned medium, 1× B27+VitA, 10 mM Nicotinamide, 1.25 mM N-acetyl-L-cysteine, 100 μg/mL Primocin, 5 μM Y-27632, 5 nM Heregulin B1, 5 ng/mL FGF-7, 20 ng/mL FGF-10, 0.5 μM A83-01, 5 ng/mL EGF, 1 μM SB202190) or Type II medium (Advanced DMEM/F12, 20% Wnt3a-conditioned medium, 10% R-spondin1-conditioned medium, 10% Noggin-conditioned medium, 1× B27+VitA, 10 mM Nicotinamide, 1.25 mM N-acetyl-L-cysteine, 0.5 μg/mL Hydrocortisone, 100 nM β-estradiol, 10 μM Forskolin, 100 μg/mL Primocin, 5 μM Y-27632, 5 nM Heregulin B1, 20 ng/mL FGF-10, 0.5 μM A83-01, 5 ng/mL EGF）并在37°C、5% CO2的培养箱中继续培养。每2-4天更换一次培养基。7-21天后对类器官进行传代。

 

图 使用Type I或Type II培养基获得的乳腺类器官明场图像（PMID：33692550）[2]

 

图 乳腺类器官代表性明场图像，太稀疏（左）、太密集（中）或密度适中（右）（PMID：33692550）[2]

 

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Product Name	Catalog Number	Specifications
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