首页 / 解决方案 / 解决方案详情

细胞外基质凝胶应用操作指南

细胞外基质凝胶是一种从EHS小鼠肿瘤中提取的可溶性基底膜制剂,富含细胞外基质蛋白。其主要成分包括层粘连蛋白、IV型胶原、肝素硫酸蛋白多糖(HSPG)、nidogen,以及TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织型纤溶酶原激活剂等生长因子,这些生长因子是EHS肿瘤固有的。在20世纪80年代中期,丹麦的J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm分别发现并特别描述了细胞外基质凝胶。主要的生产过程包括用生理盐水提取/洗涤肿瘤匀浆以获得可溶性蛋白,然后从产品中提取不溶性复合物的溶剂提取,以及在低温下用缓冲溶液进行透析以获得无色至淡黄色的溶液。

细胞外基质凝胶为组织和细胞提供了支持、拉伸强度和支架支持。它还作为细胞粘附和移动的三维结构,以及生长因子、趋化因子和细胞因子的储存库。此外,它还可以被用作细胞形态发生和分化的信号分子。

图:细胞外基质凝胶的应用指南

 

以下是使用由Arcegen Biologicals开发和生产的Arcegel细胞外基质凝胶及其他相关试剂进行实验所得到的结果。

侵袭实验和3D培养

血管生成

 

图:HUVEC细胞血管生成实验结果及血管免疫荧光染色

肿瘤内的

图:将HepG2细胞皮下植入到雌性BALB/c-nu小鼠体内,并观察了1个月。

 

类器官培养

相关产品 - 基质凝胶

Product Types

Product Name

Catalog Number

Specification

Basic Concentration

 

Arcegel Matrix LDEV-Free 

C231001

5/10 mL

Arcegel Matrix Phenol Red-Free, LDEV-Free

C231002

5/10 mL

Low Growth Factor

Arcegel Matrix GFR, LDEV-Free Matrigel

C231003

5/10 mL

Arcegel Matrix GFR, Phenol Red-Free, LDEV-Free

C231004

5/10 mL

 

 

High Concentration

 

Arcegel Matrix High Concentration, LDEV-Free

C231005

5/10 mL

Arcegel Matrix High Concentration, Phenol Red-Free, LDEV-Free

C231006

5/10 mL

Arcegel Matrix High Concentration, GFR, LDEV-Free

C231007

5/10 mL

Stem Cell-Specific

Arcegel Matrix hESC-Qualified, LDEV-Free

C231008

5/10 mL

Organoid-Specific

Arcegel Matrix for Organoid culture, Phenol Red-Free, LDEV-Free

C231009

5/10 mL

 

相关产品 - 细胞因子 

 

Wnt3a 类器官培养案例的结果

Protein Name         

Species

Catalog Number   

Specifications

Wnt3a

Human

C230259

100/500 ug

R-Spondin 1

 

Human

C230254

100/500 ug

Mouse

C230257

100/500 ug

Noggin

 

Human

C230462

100/500 ug

Mouse

C230612

100/500 ug

EGF

 

Human

C230329

100/500 ug

Mouse

C230540

100/500 ug

FGF-2

 

Human

C230295

100/500 ug

Mouse

C230522

100/500 ug

FGF-4

Human

C230346

100/500 ug

FGF-7

 

Human

C230417

100/500 ug

Mouse

C230587

100/500 ug

FGF-9

 

Human

C230347

100/500 ug

Mouse

C230548

100/500 ug

FGF-10

 

Human

C230418

100/500 ug

Mouse

C230588

100/500 ug

FGF-19

Human

C230343

100/500 ug

Activin A

Human/Mouse/Rat

C230520

100/500 ug

BMP-2

Human/Mouse/Rat

C230308

100/500 ug

BMP-4

 

Human

C230310

100/500 ug

Mouse

C230249

100/500 ug

BMP-7

Human

C230311

100/500 ug

DKK-1

Human

C230321

100/500 ug

HGF

Human

C230260

100/500 ug

GDNF

 

Human

C230355

100/500 ug

Mouse

C230552

100/500 ug

IGF-1

Human

C230371

100/500 ug

Shh

 

Human

C230493

100/500 ug

Mouse

C230624

100/500 ug

BDNF

Human

C230262

100/500 ug

NRG1

Human

C230454

100/500 ug

SHH

 

Human

C230493

100/500 ug

Mouse

C230624

100/500 ug

 

相关产品 - 类器官培养基

Product Type

Product Name       

Catalog Number

Specifications

Mouse Small Intestine

3DCultr Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse)

C231105

l00/500mL

Colon Cancer (Human)

3DCultr Intestinal Cancer Organoid Growth Medium (Human)

C231106

l00/500mL

Gastric Cancer (Human)

3DCultr Gastric Cancer Organoid Growth Medium (Human)

C231107

l00/500mL

Liver Cancer (Human)

3DCultr Liver Cancer Organoid Growth Medium (Human)

C231108

l00/500mL

Breast Cancer (Human)

3DCultr Breast Cancer Organoid Growth Medium (Human)

C231109

l00/500mL

Lung Cancer (Human)

3DCultr Lung Cancer Organoid Growth Medium (Human)

C231110

l00/500mL

Esophageal Cancer (Human)

3DCultr Esophageal  Cancer Organoid Growth Medium (Human)

C231111

l00/500mL

Ovarian Cancer (Human)

3DCultr Ovarian cancer Organoid Growth Medium (Human)

C231112

l00/500mL

Pancreatic Cancer (Human)

3DCultr Pancreatic cancer Organoid Growth Medium (Human)

C231113

l00/500mL

 

其他类器官培养试剂

Product Type           

Product Name   

Catalog Number

Specifications

 

 

Tissue Cell Digestion

 

Collagenase I 

C230120

100mg

Collagenase II 

C230121

100mg

Collagenase III 

C230122

100mg

Collagenase IV

C230123

100mg

Collagenase V

C230124

100mg

 

Mycoplasma Series

DfCell 1000×Mycoplasma Prevention Reagent

C230102

1mL

DfCell Mycoplasma LAMP Detection Kit

C230105

25/60T

 

附录

问:如何解冻Arcegel基质凝胶,需要多长时间才能解冻?

答:将整瓶Arcegel基质凝胶放入装有碎冰的盒子中,然后将盒子放入4°C的冰箱中过夜解冻,确保有足够的碎冰。解冻后,旋转瓶子检查Arcegel基质凝胶是否完全解冻,确保没有冰晶或凝胶块残留。我们建议过夜解冻,而蛋白质浓度较高的Arcegel基质凝胶可能需要更长时间。不要直接将Arcegel基质凝胶的瓶子放入4°C冰箱中解冻,也不要将装有Arcegel基质凝胶的冰盒放在冰箱门上或靠近冰箱门的地方。下图供参考:
 

 

问:Arcegel基质凝胶解冻后的状态是怎样的?

答:标准的Arcegel基质凝胶解冻后应为清澈的液体,不含酚红,这表明其清晰透明;蛋白质浓度越高,解冻后的液体粘度越大。请参考下图中的Arcegel基质凝胶解冻后的状态,左边两瓶是高浓度型,右边两瓶是标准型。

问:如何分装和冷冻Arcegel基质凝胶以备使用?

答:解冻后,Arcegel基质凝胶可以分装到多个小管中,这些管子都应该是预冷的冷冻管,快速冷冻并储存,以避免反复冻融。使用过程中涉及的所有物品在使用前都应预冷,包括预冷的移液枪、枪头和管子来处理基质凝胶。
 

问:在融化Arcegel基质凝胶时发现凝胶,为什么无法融化?

答:Arcegel基质凝胶对温度非常敏感。其在超过10°C的温度下开始凝胶化,而在超过22°C的温度下凝胶化过程会加速。如果即使在正常条件下接收后也发生凝胶化,这可能是因为融化程序不当或在融化过程中环境温度上升,导致部分凝胶化。因此,必须严格按照融化程序指南操作,并确保在融化过程中保持低温环境。

问:如何稀释Arcegel基质凝胶?

答:通常,Arcegel基质凝胶可以与预冷的无血清培养基或pH 7.4的PBS稀释。由于不同批次之间的浓度可能存在差异,建议根据具体的工作浓度进行稀释,而不是使用比例稀释或稀释因子。

问:使用Arcegel时应注意哪些事项?

答:所有与Arcegel基质凝胶接触的耗材和试剂都应预冷,整个操作过程应在冰上进行,以保持低温环境。Arcegel基质凝胶对温度非常敏感,一旦温度超过10°C就开始凝胶化。
 

细胞因子使用指南:

离心:收到后,瓶内含有冻干粉末。在打开前,快速离心10,000-12,000 rpm 30秒,以确保任何可能脱落的蛋白质附着在瓶盖或瓶壁上,沉积在瓶底。

复溶:根据说明,用指定的溶剂复溶,目标浓度范围为0.1-1.0 mg/mL。注意:避免剧烈涡旋,因为这可能导致蛋白质变性。用移液枪头轻轻敲打或让溶液在室温下放置一段时间可以帮助溶解。

稀释:用含有0.1% BSA、10% FBS或5%海藻糖的PBS或基础培养基溶液稀释(确保无菌)。使用上述任何一种稀释剂稀释复溶的蛋白质溶液,根据所需的工作浓度调整稀释浓度,但不低于10 μg/mL。分装到小管中,储存在-20至-80°C。

使用:需要时,解冻一份分装的细胞因子,并加入到培养基中以达到所需的浓度。避免细胞因子反复冻融。