胶原酶（Collagenase）是一种蛋白酶、肽链内切酶，能够特异性识别 Pro-X-Gly-Pro 序列（该序列高频率出现在胶原中）并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，这种胶原纤维广泛存在结缔组织内。

本品来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有胶原酶（即梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能够降解天然胶原和网状纤维，还含有其他蛋白酶、多糖酶、脂酶等，能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质，非常适用于组织消化。

目前商业化提供的细菌胶原酶主要根据胶原酶活性的差异，分为四种类型：胶原酶 I 型、II 型、III 型和IV 型，本品为 II 型胶原酶，≥125 U/mg solid（在 37℃，pH7.5 的条件下，5 h 内水解胶原产生相当于 1 µM L-亮氨酸的酶量定义为 1 个酶活力单位），可用于心、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。

 

储存条件

室温运输。4℃避光保存，2 年有效。储存液-20℃避光冻存。

 

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

本产品仅用于科研。

 

使用说明

1、胶原酶储存液的配制

向每管 100 mg 的胶原酶中加入 1 mL 含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’s 平衡盐溶液，含Ca²⁺、Mg²⁺）， 轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成 100 mg/mL（即 100×）储存液。然后用低蛋白结合性的 0.22 μm 的滤膜过滤除菌，分装成小份量，然后于-20℃避光冻存。

使用前于冰上解冻，避免反复冻融。其用于组织和细胞分散的常用浓度为：0.5-2.5 mg/mL，用于软骨消化的常用浓度为 1-2 mg/mL 需要根据特定的实验条件或者参考相应的文献资料确定所需的最佳工作浓度。

2、组织的分离

1）使用无菌手术刀或剪刀将组织切成 3-4 mm 大小的组织块。

2）利用含 Ca²⁺、Mg²⁺的 HBSS 洗涤组织块数次。

3）加入足量的含 Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至需要工作浓度。

4）于 37℃孵育 4-18 h。消化时使用水平摇床以及用 3 mM 的 CaCl₂补充消化可以提高消化效率。

5）已分散开的细胞可使用不锈钢或尼龙网筛筛得，收集备用。未完全解离的组织另外添加适量的新鲜胶原酶工作液于 37℃继续孵育。

6）利用不含胶原酶的 HBSS 洗涤收集的细胞数次。

7）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

8）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。

3、器官灌注

1）向 37℃预热含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS 中加入胶原酶，另添加 3 mM 的CaCl₂有助于提高分离效率。

2）按照已优化的速率对相应的器官灌注胶原酶工作液。

3）将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，从而将已解离的细胞或小片段组织块与较大团块分离开来，未充分解离的组织需利用新鲜胶原酶工作液于 37℃进一步孵育。

4）利用不含胶原酶的 HBSS 洗涤收集的细胞数次。

5）细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度。

6）于细胞培养皿上利用合适细胞培养基接种细胞。