在细胞功能实验中，检测细胞增殖、毒性和活性至关重要。目前，常用的细胞增殖和活性检测试剂通常基于细胞内线粒体脱氢酶的还原能力，如MTT法、XTT法、WST-1法、CCK法等。

Arcegen Biology推出了基于WST-8的细胞活性检测试剂盒——即细胞计数试剂盒（简称CCK试剂盒），与MTT相比具有更低的细胞毒性，检测更灵敏，操作更简便。
 

 

实验原理

WST-8 (2-(2-Methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium monosodium salt)可以被线粒体中的脱氢酶还原，在电子耦合试剂1-甲氧基PMS的存在下形成高度水溶性的橙黄色甲酰胺。颜色强度与细胞增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450纳米波长下测量吸光度值（OD值），间接反映活细胞的数量。

表1. CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

Detection Method	MTT Method	XTT Method	WST-1 Method	CCK Method
Formazan Solubility	Poor (Requires dissolution in organic solvent for detection)	Good	Good	Good
Product Characteristics	Powder	2 bottles of solution	Solution	1 bottle of solution
Usage Method	Dissolve in solution before use	Ready-to-use upon preparation	Ready-to-use	Ready-to-use
Detection Sensitivity	High	Very high	Very high	High
Detection Time	Relatively long	Relatively short	Relatively short	Short
Detection Wavelength	560-600nm	420-480nm	420-480nm	430-490nm
Cell Toxicity	High, complete disappearance of cell morphology	Very low, no change in cell morphology	Very low, no change in cell morphology	Very low, no change in cell morphology
Reagent Stability	Fair	Poor	Fair	Very good
Batch Sample Testing	Possible	Extremely suitable	Extremely suitable	Extremely suitable
Convenience Level	Fair	Convenient	Convenient	Extremely convenient

 

产品特点

易用性：产品为液体，开瓶即用；甲酰胺可溶于水，无需用有机溶剂溶解。
高灵敏度：宽广的线性范围，高灵敏度，良好的重复性。
低细胞毒性：细胞毒性极低，不影响后续实验。
良好的稳定性：培养基中含酚红和血清不影响检测结果。
广泛的适用性：适用于大规模、高通量的样本测试。

 

应用领域

细胞增殖实验、细胞毒性实验、药物筛选、肿瘤药物敏感性测试、生物因子活性检测等。

 

产品数据

与类似产品的性能比较

 

细胞类型：293T人胚肾细胞；

培养基：含10% FBS的高糖DMEM培养基；

孵育时间：3小时；细胞数量：1000。
 

参考已发表的文献数据

GIST-T1细胞增殖实验 CRTL代表空白对照组，Lv-shNC指的是阴性干扰组，而Lv-shOrai1表示Orai1基因敲除组。	ROS17/2.8细胞增殖实验 WT指的是野生型组，而KO代表BK基因敲除组。
rMSCs细胞活性检测实验 在浓度为2.5、5、10和20微克/毫升的条件下，对G/SWCNT杂化物、G和SWCNTs处理后的细胞活性进行检测。	rMSCs细胞增殖实验 在1、3和7天的时间内，对浓度为2.5、5、10和20微克/毫升的G/SWCNT杂化物处理后的细胞活性进行检测。
Huh6细胞对EZH2基因的干扰及其阴性对照组细胞活性的检测。	检测HepG2细胞对EZH2基因的干扰效果以及阴性对照组细胞活性，通常涉及对细胞增殖和毒性的评估。EZH2是一种组蛋白甲基转移酶，
GIST-T1细胞活性检测实验 在不同浓度的2-APB（0、50、100和150微米）处理下的细胞活性检测实验	GIST-T1细胞活性检测实验 在不同浓度的SKF-96365（0、0.5、1.0和1.5微米）处理下的细胞活性检测实验

 

常见问题解答

Q1: CCK的储存和稳定性如何？

A1: CCK具有高稳定性。在避光条件下，-20°C下有效期为2年，4°C下有效期为1年。对于频繁使用的情况，建议在4°C下储存，以避免反复冻融。CCK通常呈粉红色，颜色的显著变化可能表明质量发生了变化。

Q2: CCK的细胞毒性如何？

A2：CCK的毒性非常低，这允许在CCK检测之后使用相同的细胞进行其他细胞增殖测试，例如结晶紫染色、中性红染色或DNA荧光染色。

Q3: CCK会染色活细胞吗？

A3: 不会，WST-8不会进入细胞内部进行染色。整个颜色发展反应都发生在培养体系中。此外，WST和WST-8形成的甲酰胺都是高度水溶性的，反应结束后更换新鲜培养基可以去除外来成分。

Q4: 进行细胞活性检测时，每个孔应该接种多少细胞？

A4：当使用标准的96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为每个孔1000个细胞（100 μL培养基）。对于白细胞的检测灵敏度相对较低，因此建议每个孔至少接种2500个细胞（100 μL培养基）。

Q5: 对于使用6孔或24孔板的实验，CCK试剂的用量是多少？

A5：对于使用6孔或24孔板的实验，根据每孔所需的接种体积计算，并添加占每孔培养基总体积10%的CCK溶液。

Q6: 培养基中的背景颜色，如酚红，会影响细胞活性检测吗？

A6：不会，计算时可以减去培养基中酚红的吸光度，从而消除其对检测的影响。

Q7: 384孔板能否用于细胞增殖和活性检测实验？

A7: 是的，CCK-8产品的用量是每孔培养基总体积的10%。建议先将CCK-8产品稀释一倍，然后添加到每孔培养基总体积的20%，以减少误差。

Q8: 是否只能在450纳米波长下测量OD值？

A8：OD值可以在450纳米波长下测量，但如果没有这个波长的滤光片，可以选择430-490纳米之间的吸收滤光片。不过，450纳米的滤光片能提供更高的灵敏度。

Q9: 如果暂时不测量OD值应该怎么办？

A9：如果暂时不测量OD值，可以在每个孔中加入10 μL的0.1 M盐酸溶液或1% w/v的SDS溶液，然后将培养板覆盖并储存在室温避光处。在24小时内测量不会导致吸光度发生变化。

Q10: 添加CCK-8时可以不更换培养基吗？

A10：通常，在添加CCK-8时不需要更换培养基。但是，如果培养基中含有氧化还原物质，可能会出现误差，这时必须使用其他培养基。

Q11: 实验中遇到高OD值应该怎么处理？

A11: 你可以减少加入CCK-8后的孵育时间。例如，你可以将加入CCK-8试剂后的孵育时间从2小时缩短到1小时。此外，你也可以适当减少细胞数量。

Q12: 实验中遇到低OD值应该怎么处理？

A12: 可以使用两种方法：1. 适当增加细胞数量。2. 延长加入CCK-8试剂后的反应时间。

Q13: 每次实验都需要做标准曲线吗？

A13: 建议这样做。尽管使用的细胞是相同的，但它们的状态可能会有所不同。对于状态不同的细胞，建议每次都创建一个标准曲线。

 

相关产品 

Product Name	Catalog Number	Specification
ClearV Cell Counting Kit (CCK-8)	C331301S	500 T
	C331301M	1000 T
	C331301L	3×1000 T
	C331301T	10×1000 T